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A obesidade é um fator de prognóstico negativo para o câncer de mama. No entanto, os mecanismos biológicos subjacentes a este efeito ainda são em grande parte desconhecidos. Uma hipótese emergente é que a transferência de ácidos graxos livres (AGL) entre adipócitos e células tumorais pode ser alterada em condições de obesidade, contribuindo para a progressão do tumor. Atualmente, há uma escassez de modelos para estudar o crosstalk de adipócitos mamários humanos (M-Ads). Quanto a outros tipos de adipócitos brancos isolados, aqui mostramos que os M-Ads humanos morrem dentro de 2 a 3 dias por necrose quando cultivados em 2D. Como alternativa, os M-Ads foram cultivados em matriz de fibrina, modelo 3D que preserva sua distribuição, integridade e função metabólica por até 5 dias em concentrações fisiológicas de glicose (5 mM). Concentrações mais elevadas de glicose frequentemente utilizadas em modelos in vitro promovem a lipogênese durante a cultura de M-Ads, prejudicando sua função lipolítica. Utilizando inserções transwell, os adipócitos incorporados na matriz foram co-cultivados com células de cancro da mama. Foi observada transferência de FFA entre M-Ads e células cancerígenas, e este evento foi amplificado pela obesidade. Juntos, esses dados mostram que nosso modelo 3D é uma nova ferramenta para estudar o efeito dos M-Ads nas células tumorais e além, com todos os componentes do microambiente tumoral, incluindo as células imunológicas.